色综合久久无码中文字幕app-四虎av永久在线精品免费观看-亚洲熟女中文字幕男人总站-亚洲国产区男人本色-免费无码av片在线观看网站

網(wǎng)站首頁(yè)技術(shù)中心 > DNA轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書
產(chǎn)品目錄
DNA轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書
更新時(shí)間:2015-05-08 點(diǎn)擊量:1281

                    

DNA轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書

                                       

DNAFect Transfection Reagent

 

目錄號(hào):YJ0860

保存:2-8℃

 

組分說(shuō)明

 

                                 Catalogno.               YJ0860          YJ0860A

                                    KitSize                 0.5 ml            1 ml

 

                        DNAFect Transfection Reagent         0.5 ml          1 ml

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

DNAFect是一種的陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑,適用于多種細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞系包括原代細(xì)胞都有較高的轉(zhuǎn)染效率,并且對(duì)細(xì)胞毒性極低。本轉(zhuǎn)染試劑可應(yīng)用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染、共轉(zhuǎn)染、高通量DNA轉(zhuǎn)染,基因表達(dá)和基因功能研究。

 

注意事項(xiàng)

 

 1.轉(zhuǎn)染試劑使用前應(yīng)先震蕩搖勻。

 

 2.轉(zhuǎn)染效率與細(xì)胞密度有很大關(guān)系,不同實(shí)驗(yàn)間應(yīng)保持一個(gè)基本的傳代步驟,確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞沒(méi)有長(zhǎng)滿或處于靜止期。

 

    一般貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染的*細(xì)胞密度是80-90%,懸浮細(xì)胞的*細(xì)胞密度為3-5×10 5細(xì)胞/ml,用于轉(zhuǎn)染的*細(xì)胞密度

 

                                                                              

3. 轉(zhuǎn)應(yīng)染根據(jù)不同的時(shí)不要在培細(xì)養(yǎng)胞基中加入抗生素,否類型或用途而異。則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。  

 

 

操作步驟

 

     對(duì)于大部分的細(xì)胞系, DNA與DNAfect的比例在1:2至1:3時(shí)轉(zhuǎn)染效率較高。為了提高轉(zhuǎn)化效率、表達(dá)水平并且減少細(xì)胞毒性,實(shí)驗(yàn)應(yīng)在細(xì)胞密度較大時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。以下操作以24孔板每孔細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染操作為例。

     1.   貼壁細(xì)胞:轉(zhuǎn)化前一天,在24孔板的每孔中加入500 μl無(wú)抗生素的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,并于每孔中接種0.5-2×105 個(gè)細(xì)懸浮細(xì)胞:在胞,待細(xì)胞轉(zhuǎn)細(xì)染之前,在胞長(zhǎng)至80-90%24孔板的滿時(shí)進(jìn)每行孔中加入轉(zhuǎn)染。500μl無(wú)抗生素的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,并于每孔中接種3-5×10 5個(gè)細(xì)胞。

 

     2.   轉(zhuǎn)染當(dāng)天,首先準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染復(fù)合物,對(duì)于每孔細(xì)胞按照以下用量配制:

          a. 取適量DNA,加入25 μl無(wú)血清培養(yǎng)基,并輕輕的混合均勻。

          b. 取適量DNAfect,加入25 μl無(wú)血清培養(yǎng)基,輕輕混勻,并于室溫孵育5分鐘。

 

          c. 孵育5分鐘之后,將稀釋的DNA和稀釋的DNAfect混合(使DNA以及DNAfectin的終總體積為50 μl),輕輕混合均勻,并在室溫下孵育20分鐘(溶液可能會(huì)出現(xiàn)絮狀,但不會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率)

 

              

    注意:該混合物在室溫下可以穩(wěn)定保存6小時(shí)。

     3.   將步驟1中24孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基更換成450 μl無(wú)血清培養(yǎng)基,然后將步驟2中50 μl轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入到24細(xì)胞孔板內(nèi),輕輕前后推動(dòng)24孔板以混勻。

 

     4.   將細(xì)胞置于含5%CO2,37℃條件下培養(yǎng)4-6小時(shí)后,更換成500 μl生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

     5.   18-48小時(shí)后進(jìn)行轉(zhuǎn)染基因表達(dá)的檢測(cè)。

 

     6.   對(duì)于穩(wěn)定的細(xì)胞系:在轉(zhuǎn)染24小時(shí)后,細(xì)胞按照1:10的比例傳代,第二天可加入篩選培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。

 

        注:(1) 該說(shuō)明為一個(gè)24孔的用量,若同時(shí)轉(zhuǎn)幾個(gè)孔,配制轉(zhuǎn)染復(fù)合物的量需加倍;若轉(zhuǎn)染其他類型孔板,DNA和DNAfect用量見(jiàn)附表,

 

              該附表用量以293T細(xì)胞為轉(zhuǎn)染細(xì)胞時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)用量。

 

             (2) 轉(zhuǎn)染4-6小時(shí)后也可以不更換生長(zhǎng)培養(yǎng)基,但由于DNAfect具有一定的細(xì)胞毒性,作用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能使某些細(xì)胞出現(xiàn)大量死亡現(xiàn)象,建議更換生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

 

            (3) 優(yōu)化條件:想要得到更高的轉(zhuǎn)染效率,應(yīng)優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件:培養(yǎng)物、DNA濃度、細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞與DNA復(fù)合物的孵育時(shí)間等條件都應(yīng)進(jìn)行優(yōu)化。

 

           

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

主站蜘蛛池模板: 亚欧洲乱码视频一二三区| 日韩精品 中文字幕 视频在线| 精品人妻少妇一区二区三区| 50岁熟妇的呻吟声对白| 88国产精品欧美一区二区三区| 年轻内射无码视频| 欧美s码亚洲码精品m码| 无码人妻一区二区三区免费看| 亚洲乱码日产精品一二三| 中文字幕丝袜第1页| 国产情侣疯狂作爱系列| 在线观看黄a∨免费无毒网站| 国产欧美一区二区精品性色| 亚洲中文字幕婷婷在线| 亚洲成a人片在线观看无码下载 | 亚洲乱人伦中文字幕无码| 在线看片免费人成视频影院看 | 久久综合婷婷成人网站| 波多野结衣绝顶大高潮| 国产福利在线观看免费第一福利| av在线无码专区一区| 国产人妻精品一区二区三区不卡 | 日韩人妻无码精品无码中文字幕 | 国产 亚洲 中文在线 字幕| 57pao成人国产永久免费视频| 三级4级全黄60分钟| 国产成人av在线免播放app| 天堂网www最新版官网| 国产无套抽出白浆来| 男女后进式猛烈xx00动态图片| 18禁黄无遮挡网站| www片香蕉内射在线88av8| 日本三级欧美三级人妇视频| 蜜桃色欲av久久无码精品软件| 无码午夜福利片| 国产精品午夜爆乳美女视频| 东北老女人高潮大喊舒服死了| 熟妇人妻av无码一区二区三区 | 久久久久人妻一区精品色欧美| 欧美成人午夜免费影院手机在线看| 男人进入女人下部视频|