克倫特羅檢測試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物克倫特羅將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗克倫特羅抗體，加入酶標(biāo)記物后，用 TMB 底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物克倫特羅的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物克倫特羅的含量。
克倫特羅檢測試劑盒的樣本前處理步驟：
一、樣本處理前須知
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。
u 樣本前處理需配制：
配液 1 0.1M HCl 溶液取 0.86ml 濃 HCl 加水定溶至 100ml。
配液 2 0.1M NaOH 溶液稱取 0.4g NaOH 加水定溶至 100ml。
配液 3 乙腈-0.1M HCl 溶液V 乙腈：VHCl =84：16。
二、樣本處理：
（a）尿樣本的處理方法
取 20?l 清亮尿樣直接測定（如果尿樣渾濁一定要過濾或 4000r/min 離心 10min，直至得到清亮尿樣），暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。 3、 在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于樣本稀釋倍數(shù): 1 倍 洗板的*性，正確的洗板操作是 ELISA 測定
（b）組織樣本的處理方法一 程序中的要點。
1、稱 2±0.05g 均質(zhì)后的組織至 50ml 離心管中，加 4、 所有恒溫孵育過程，避免光線照射，用蓋板膜入 6ml 去離子水，充分振蕩 2min，室溫 蓋住微孔板。
4000r/min 以上離心 10min(注：若組織樣本中油 u 操作步驟：
脂含量較高，可在振蕩后放入 85℃水浴 10min 1、從 2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20～后再離心)； 25℃）平衡 30min 以上，注意每種液體試劑使
2、取 20?l 上層液進行分析。 用前均須搖勻。
樣本稀釋倍數(shù): 4 倍 2、取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放
（c）組織樣本的處理方法二 入自封袋，保存于 2～8℃。
1、稱取 2 ± 0.05g 均質(zhì)后的組織于 50ml 離心管 3、編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每中，加入 6ml 乙腈-0.1MHCl，振蕩 2min,室溫 個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和
4000r/min 以上離心 10min； 樣本孔所在的位置。
2、取上清 3ml，加入 2ml 0.1M NaOH，加入 6ml 4、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本 20?l/孔到各自的微孔中，然后加乙酸乙酯，振蕩 1min，室溫 4000r/min 以上離 酶標(biāo)記物 50?l/孔，再加入 80?l/孔的抗體工作心 10min。取全部上清于 50～60℃氮氣流或空 液，用蓋板膜蓋板，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境氣流吹干； 反應(yīng) 30min。
3、加入 1ml 去離子水溶解干燥后的殘留物，混合 5、將孔內(nèi)液體甩干，用去離子水 250?l/孔洗板 4～30s； 5 次，每次間隔 15～30 秒，用吸水紙拍干（拍
4、取 20 ?l 用于分析。 干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
樣本稀釋倍數(shù)： 1 倍 6、顯色：加入底物 A 液 50?l/孔，再加入底物 B
（d）飼料處理方法 液 50?l/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯
1、稱1.0±0.05g 研碎的飼料樣品于50ml 離心管中， 色 15min。
加入 10ml 甲醇，再加入 5g 無水硫酸鈉，充分 7、測定：加入終止液 50?l/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)振蕩 2min；15℃ 4000r/min 以上離心 10min； 定酶標(biāo)儀于 450nm 處（建議用雙波長 450/630n
2、吸出離心后的上清液 1ml，于 50～60℃氮氣流 m 檢測，5min 內(nèi)讀數(shù)），測定每孔 OD 值。或空氣流吹干，用 1 ml 去離子水溶解干燥后的 七、結(jié)果判定殘留物，再加入 1ml 正己烷混合 30s ；15℃ 結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第 1 種方4000r/min 以上離心 5min；去除上層有機相；
法，定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與
3、取下層 20 ?l 用于分析。
其所含克倫特羅量成負(fù)相關(guān)。
樣本稀釋倍數(shù)：10 1、粗略判定。
